TS2 Biot. : GG 1 Chapitre III : Les méthodes du clonage moléculaire chez E. coli 1. Insertion d’un insert dans un vecteur 1.1. Par restriction – ligature L’insert et le vecteur sont coupés, soit par la même endonucléase de restriction, soit par deux enzymes...
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TS2 Biot. : GG 1 Chapitre III : Les méthodes du clonage moléculaire chez E. coli 1. Insertion d’un insert dans un vecteur 1.1. Par restriction – ligature L’insert et le vecteur sont coupés, soit par la même endonucléase de restriction, soit par deux enzymes différentes, et ligaturés. DOCUMENT 1 : Restriction par EcoRI et ligature In this example, a small amount of foreign DNA (a few nanograms) is digested with EcoRI. This foreign DNA can come from any source, the only requirement being that it contains the same restriction endonuclease recognition sites as the vector. Plasmid vector is also digested with EcoRI to create a linear DNA molecule. The “sticky” single-stranded ends of the foreign DNA can align and base-pair with the complementary “sticky ends” of the plasmid, after which DNA ligase covalently bonds foreign DNA to plasmid DNA. This recombinant DNA is introduced into E. coli by a process called transformation. Since the bacteria themselves are not resistant to ampicillin, grow
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