TS2 Biot. : GG 1 CHAPITRE VI : LE SEQUENCAGE DE L’ADN 1. Principe du séquençage par la méthode enzymatique de Sanger On utilise, dans cette technique, une solution composée de molécules d’ADN monocaténaires, toutes identiques. - L’hybridation d’une amorce,...
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TS2 Biot. : GG 1 CHAPITRE VI : LE SEQUENCAGE DE L’ADN 1. Principe du séquençage par la méthode enzymatique de Sanger On utilise, dans cette technique, une solution composée de molécules d’ADN monocaténaires, toutes identiques. - L’hybridation d’une amorce, au même endroit sur chacune des molécules d’ADN, permet à l’ADN polymérase de catalyser la synthèse du brin complémentaire de la matrice d’ADN monocaténaire initialement purifiée. - L’incorporation de ddNTP dans la chaîne en cours de synthèse empêche la fixation d’un autre dNTP car la liaison 5’-3’ phosphodiester ne peut plus s’établir. Exemple : si c’est du ddATP qui est ajouté dans le milieu, il y aura arrêt de la synthèse du polynucléotide en face des thymidine de la matrice ADN (Cf document 1). On se trouve donc en présence d’un mélange de nouvelles chaînes de désoxyribonucléotides de différentes longueurs, qui se terminent toutes par un ddATP. - La séparation des oligonucléotides synthétisés est réalisée par électrophorèse en ge
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